Михаил Кисиц и Регина Ландис организовали студию при ТЮЗе студию кукольников, и 1 мая 1934 года состоялось открытие первого театрального сезона премьерным спектакля «Петрушка в гостях у школьников».
Первые спектакли по собственным пьесам были поставлены Региной Ландис, позже в репертуаре появляются спектакли по произведениям русской классики.
Одним из первых режиссёров студии была Е. Захарова, ею был поставлен спектакль с куклами – марионетками по произведению А. Чехова «Каштанка».
В 1936 году театр стал самостоятельной творческой организацией под руководством артиста и режиссёра В. Виноградова.
А. Астраханцев, Т. Добрычева, В. Ткачёв, А. Шевелова, В. Горевская, Г. Пономарёва, Ф. Бессонов, Г. Березин, В.Лещинский, А. Миронова, Е. Псарёва, И.Макаров, И.Дивов, А. Цветова.
До 1952 года руководил театром В. Виноградов с перерывом на годы войны. В этот период в город Новосибирск эвакуировали Государственный Центральный театр кукол.
С июля 1942 года по август 1945 года Новосибирский театр кукол был филиалом Центрального театра кукол С. Образцова. Прославленный коллектив огромное влияние на новосибирских кукольников. В то время театр напряжённо работал не только в Сибири, но и выезжал на длительные гастроли в прифронтовые районы со спектаклями и концертами.
В 1952 году главным режиссёром театра стал заслуженный деятель искусств РФ Г. Кудрявцев. Рядом с режиссёром проходили свой творческий путь художники Г. Томилин, М. Вильям, артисты А. Кудрявцева, Т. Дробычева, Ф. Шоль, Н. Филиппова… Заслуженный артист РФ Валентин Лещинский, сыгравший за 55 лет творческой деятельности множество прекрасных ролей, создавал музыку, работал над художественным образом героев, занимался механикой кукол и осуществлял постановки в качестве режиссёра Заслуженная артистка России Людмила Крупницкая за 40 лет творческой деятельности создала галерею ярких образов, которые запоминались зрителям надолго.
На сцене театра работали такие режиссёры и художники, как С. Горбушин, А. Свириденко, Н. Леонтьева, А. Панин, заслуженный работник культуры РФ А. Корытный, С. Иванников, Д. Сидоров, Р. Ватолкин и др.
Репертуарная политика театра формируется в рамках программы «СКАЗКИ НАРОДОВ МИРА», поэтому в репертуаре театра присутствуют национальная драматургия и кукольная классика.
Коллектив Новосибирского областного театра кукол входит в состав международной организации кукольников УНИМА.
Театр является участником международных и региональных фестивалей театров кукол.
На протяжении последних нескольких лет творческий коллектив театра неоднократно выезжал в Японию, США и Таиланд, где принимали участие в симпозиумах, семинарах, фестивалях кукольных коллективов мира. Кукольники представляли спектакли «Вместе с нами поиграй!» М. Супонина и «Лесные приключения» Н. Гернет на английском и японском языках.
В настоящее время труппу театра составляют профессиональные актёры – выпускники московских, ленинградских, ярославских ВУЗов и Новосибирского театрального училища. Среди них заслуженные артисты РФ О. Гущина, Ю. Кондратьев, О. Свириденко, С. Вихорев, Л. Щелкачева.
На сегодняшний день репертуар театра составляют более 25 спектаклей, среди них: «Приключения Буратино», «Бременские музыканты», «Карлик Нос», «Белоснежка и семь гномов», «Волшебная лампа Аладдина», «Мойдодыр», «Кошкин дом"», «Конек-Горбунок», «Гадкий утенок», «Спящая красавица»; спектакли для взрослых «Безумный день или женитьба Фигаро», "Шинель", "Муму", "Похороните меня за плинтусом", "Королева красоты из Линейна", "Ревизор"..
С января 1972 года по сентябрь 2016 года руководил театром заслуженный работник культуры РФ Николай Афанасьевич Бирюля. С сентября 2016 года по июнь 2021 года он являлся художественным руководителем театра. С 1965 по 2017 гг. главным художником был заслуженный работник культуры РФ Александр Александрович Корытный; главным режиссёром - заслуженная артистка РФ Ольга Владимировна Гущина (с 2001 года по настоящее время).